准确称取试样0.5 g±0.01 g于15 mL离心管中，加1 mL甲醇（3.1.1），涡旋30 s，4000 rpm离心2 min或静置2 min。取200 µL上清液于15 mL离心管中，加入3 mL缓冲液（3.1.6），涡旋混合30 s，作为待测液。
注：试样提取和净化（5.2）过程可按照试剂盒说明书操作，不做限定。
5.3 测定步骤
5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤
吸取200 µL样品待测液于金标微孔中，抽吸5~10次使混合均匀，室温温育5 min；温育结束后，将试纸条吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，室温温育5 min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的吸水海绵，进行结果判定。
注：测定步骤建议按照试剂盒说明书。
5.3.2 检测卡与金标微孔测定步骤
吸取200 μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5~10次使混合均匀。室温温育5 min，将反应液全部加入到检测卡的加样孔中，将金标微孔中全部溶液滴加到检测卡上的加样孔中，温育5 min，进行结果判定。
注：测定步骤建议按照试剂盒说明书。
5.4 质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验
准确称取固体空白试样0.5 g±0.01 g或量取液体空白试样0.5 mL±0.02 mL于15 mL离心管中，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
5.4.2 加标质控试验
准确称取固体空白试样0.5 g±0.01 g或量取液体空白试样0.5 mL±0.02 mL于15 mL离心管中，加入适量标准工作液（3.3.2），使西地那非参考物质浓度为1.0 µg/g或1.0 µg/mL，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
准确称取固体空白试样0.5 g±0.01 g或液体空白试样0.5 mL±0.02 mL于15 mL离心管中，加入适量标准工作液（3.3.4），使他达拉非参考物质浓度为1.0 µg/g或1.0 µg/mL，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
6 结果判定
通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。结果判定也可根据产品说明书进行。
6.1 无效
控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条无效。
6.2 阴性结果
控制线（C线）显色，检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，均表示样品中不含待测组分或含量低于方法检测限，判为阴性。
6.3 阳性结果
控制线（C线）显色，检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色明显浅或检测线（T线）不显色，均表示样品中待测组分含量高于方法检测限，判为阳性。
6.4 质控试验要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
图1 目视判定示意图
7 结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。
8 性能指标
8.1 检出限
固体样品1.0 μg/g，液体样品1.0 μg/mL。
8.2 灵敏度
灵敏度≥95%。
8.3 特异性
特异性≥90%。
8.4 假阴性率
假阴性率≤5%。
8.5 假阳性率
假阳性率≤10%。
